Весомый четырехмоторный бомбардировщик, представляющий собой цельнометаллический моноплан с двухкилевым оперением, был сделан на базе среднего двухмоторного бомбардировщика Avro Model 679 Manchester. 1-й прототип Lancaster поднялся в воздух 09.01.1941, а 1-й серийный самолёт вышел из заводских цехов 31.10.1941.

Серия Lancaster Mk. III, с 1942 года получившая обозначение B.Mk.III, отличалась от Mk.I тем, что взамен британских моторов Rolls-Royce Merlin серий 28, 38 и 224 на них устанавливались их заокеанские аналоги, изготавливаемые по лицензии компанией Packard. Внешних отличий Mk.I и Mk.III фактически не имели, помимо того, они владели одинаковыми лётно-техническими колляциями и составом вооружения, впрочем обозначения сериям присвоили различные из-за различий в требованиях технического сервиса.

Lancaster впервой приняли участие в боевых действиях в марте 1942 г. А теснее с середины того же года самолёт стал основным британским тяжелым бомбардировщиком и участвовал в массированных налетах на территории Германии, Италии и Франции, используясь предпочтительно как ночной бомбардировщик. Связано это было раньше каждого с неудовлетворительной мощностью фортификационного вооружения.

Фортификационное вооружение, состоявшее из восьми 7,7-мм пулемётов Colt-Browning Mk.II, располагалось в 3 механизированных башенных турелях: по два в носовой и верхней и четыре в кормовой. Максимальная бомбовая нагрузка Ланкастера была высокой для тяжёлых бомбардировщиков 2-й мировой войны: 14000 фунтов (6356 кг). Помимо обыкновенных бомб, самолёт мог нести 8000-фунтовый (3632 кг) "блокбастер" (blockbuster) либо две 4000-фунтовые (1816 кг) сверхтяжелые бомбы (high explosive) типа «cookie». Намеренно оборудованные самолёты могли поднимать бомбы ещё крупных калибров. К одной из самых удачных операций, проведённых ими, следует отнести разрушение флагмана Немецкого флота - линкора «Tirpiz».

Каждого было построено 3039 самолетов серии Mk.III, которые окончательно были сняты с вооружения в Великобритании в 1950 г.